复习资料和笔记第1章   

初级淋巴器官的结构与功能

一，骨髓（bone marrow）：

功能：①是造血器官，免疫细胞和其他所有的血细胞都来源于此。

② B细胞分化成熟的场所。

③再次免疫应答抗体产生的主要场所。

二，胸腺（thymus）

结构：胸腺分为左右两叶，外表有被膜，每一叶中又由隔膜分成许多小叶。每个小叶外层为皮质，内部为髓质。皮质浅部为外皮质，皮质深部为内皮质。

功能：① T细胞分化，发育 成熟的场所。

②免疫调节功能。

③屏障作用。

三，法氏囊（bursa of fabricious）：（禽类特有）

①位置：位于禽类泄殖腔的上方

②功能：是禽类b细胞发育成熟的中枢免疫器官。

次级（外周）淋巴器官的结构与功能

一，淋巴结

①位置：遍布全身的淋巴通道，相互连接。

②结构：胸腺依赖区：深皮质区，主要为T细胞定居。非胸腺依赖区：浅皮质区，主要为B细胞定居。

③功能：

1.75%的T细胞和25%的B细胞定居的场所。

2.淋巴结是针对淋巴液中抗原的免疫应答场所。

3.参与淋巴细胞再循环。

4.滤过作用。

二，脾（spleen）

①位置：腹腔的左上方。

②功能：

a 35%~50%的t细胞和50%~65%的b细胞定居的场所。

b脾脏是针对血液中抗原的免疫应答场所，也是体内产生抗体的主要场所。（产生补体的主要场所是肝脏）

c合成某些生物活性物质。

d滤过作用。

淋巴细胞的循环

1.概念：

①淋巴细胞的循环：淋巴细胞在淋巴组织之间和血液中反复循环交换，就是淋巴细胞的循环。

②淋巴细胞的归巢：淋巴细胞可借助粘附分子从血液回归至淋巴组织，此为淋巴细胞归巢。

③归巢受体：细胞表面的一些特殊黏附分子，能识别淋巴结皮质部的毛细血管后小静脉上的配体。

2.淋巴细胞循环的过程：

@@3.淋巴细胞循环的意义：

①增加了淋巴细胞与抗原，侵入物等接触的机会，被活化的淋巴细胞变为效应细胞参与免疫应答。

②能使T，B细胞记忆细胞很快的分布到全身的组织和器官中。

T淋巴细胞的来源：来源于骨髓，胸腺成熟，随后移至外周淋巴细胞。

B淋巴细胞的来源：由动物骨髓或禽类腔上囊的淋巴样前体细胞分化成熟而来。

单核吞噬细胞的来源和分布：骨髓血液，血液中，组织中。

单核吞噬细胞生物学作用：

①吞噬。

②分泌生物活性物质，参与免疫应答。

③加工合成的抗原。

粒细胞的生物学作用：

①中性粒细胞：血液中的吞噬细胞。

②嗜酸性粒细胞：寄生虫感染杀伤虫体。

③嗜碱性粒细胞：非吞噬性粒细胞，参与一型超敏反应。

主要组织相容性复合物（MHC）：即编码主要组织相溶性抗原的一组紧密连锁的基因群，定位于动物与人类某对染色体的特定区域，呈高度多态性。

根据mhc的分子结构分为mhc一类分子M HC二类分子M HC三类分子。

MHC—一分子的结构：由阿尔法链和贝塔二微球蛋白非共同价结合的异二聚体。

胞外区，分为肽结合区阿尔法1，阿尔法2和Ig样区阿尔法3，贝塔2m。

跨膜区

胞内区

MHC二类分子的结构：由阿尔法链和贝塔链非共价键结合的异二聚体分子。

胞外区分为肽结合区包括阿尔法一贝塔一和Ig样区包括阿尔法2贝塔2。

跨膜区

胞内区

3.肽与mhc分子结合的结构基础。

①肽与mhc是非共价键结合。

②锚定残基：在抗原肽与m HC分子复合物中，抗原肽的两个或两个以上专司与 Mhc分子结合的氨基酸残基称为锚定残基。

③ Mhc分子抗原结合槽中与保定抗原锚定残基相对应的氨基酸残基称为锚着位。

MHC一类分子的分布：广泛分布在大部分有核细胞表面，其中淋巴细胞表面最丰富。

MHC二类分子的分布：分布较窄，主要分布于树突状细胞，巨噬细胞以及b细胞及其它呈递细胞，胸腺上皮细胞及血管内皮细胞等。

主要组织相溶性抗原基因结构及遗传：

1.MHC的多态性：

基因座位：

连锁群：

复等位基因：每一个体同源染色体上对应位置的一对基因称为等位基因。群体中，由于 突变，同一基因座位可能出现的基因系列称为复等位基因。

共显性表达：一对等位基因同位显性表达。

2.单元型遗传。

3.连锁不平衡。

单克隆抗体

1.概念

多克隆抗体（polyclonal antibody）：血清中抗体是多个抗原决定簇刺激不同B细胞克隆而产生的抗体。

单克隆抗体（MAb）：一个b细胞克隆色分泌的抗体。

单克隆抗体的特点：重链，轻链及v区独特型的特异性，亲和力，生物学性状及分子结构均完全相同。

#2.单克隆抗体的制备过程

①b细胞的制备

免疫小鼠，免疫2~3次，间隔2~4周，最后一次免疫后3~4天，取小鼠脾脏，制成10的8次方，每毫升的脾脏悬液，即为b细胞。

②骨髓瘤细胞的制备

用与免疫相同来源的小鼠骨髓瘤细胞（本身不能分泌免疫球蛋白，而且是hjprt和Tk缺陷）在含10%胎牛血清中进行培养，生长至对数期即可用于细胞融合。

③饲养细胞的准备

融合之前，将饲养细胞（小鼠胸腺细胞或腹腔巨噬细胞）制成所需浓度，加入培养板中，饲养细胞有助于杂交骨髓瘤细胞的生长，还能清除一部分死亡细胞。

④选择培养基

常用HAT培养基，在该培养基中为荣获得骨髓瘤细胞不能生长，未融合的脾细胞在两周内死亡。

⑤细胞融合

将皮细胞和骨髓瘤细胞按一定比例混合，一般为10:1，离心后吸进上清液缓慢加入融合剂50%的聚二乙醇，静止90秒，逐渐加入HAT培养基，分于加有饲养细胞的96孔培养中，置于二氧化碳培养箱中培养，经10~14天培养后，进行抗体活性检测。

⑥检测抗体

常用ELISA和凝集实验。

⑦杂交瘤细胞的克隆化

有限稀释法：稀释成5~10个细胞每毫升，加入96孔培养，满0.1毫升每孔，倒置显微镜观察。

显微操作法：倒置显微镜下降单个细胞吸入毛细管内，移到培养板中培养。

⑧杂交瘤细胞的冻存

加入二甲基亚砜，分装于冻存管内液氮（-196℃）中保存。

⑨单克隆抗体的生产

动物体内生产系统：可将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，使其无限增值，每毫升腹水可获得5~20毫克的单克隆抗体，一次可收获腹水5~10毫升。

细胞培养生产系统分为悬浮培养系统和细胞固化培养系统。

抗原抗体结合反应的条件：①具有互补性。②足够的作用力。

一，抗原抗体结合力（非共价键结合）

1.静电引力

2.范德华引力

3.氢键结合力

4.疏水作用力

二，抗原抗体反应的特点

1特异性

2比例性

3可逆性

4敏感性

免疫凝集： 大的颗粒性抗原，如细胞或细菌等与相应抗体结合后，能使抗原颗粒发生凝集，形成肉眼可见的凝集小块，即为抗原凝集。Abo血型的鉴定

沉淀的产生阻止抗原抗体复合物的自由运动。

二，免疫标记

免疫标记法：酶联免疫吸附试验（ELISA）用于测定可溶性抗原或抗体。

双抗体夹心法：用于特定特异性抗原。

间接法：用于测定特异性抗原。

酶联免疫斑点试验：用于检测效应细胞所分泌的单一细胞因子。

免疫应答（immune response）：是指机体受抗原刺激后，体内特异性淋巴细胞识别抗原，发生活化，增殖，分化或失能，凋亡，进而表现出一定生物学效应的全过程。

免疫应答产生的部位：外周免疫器官（淋巴结和脾脏）。

免疫应答的基本过程：致敏阶段，反应阶段，效应阶段。

抗原呈递细胞（APC）：是一类能摄取和处理抗原，把抗原信息传递给淋巴细胞，而使淋巴细胞活化的细胞。

抗原呈递细胞的分类：

1.树突状细胞（DC）：功能最强的抗原呈递细胞。

1.来源：主要由骨髓样干细胞分化而来，部分由淋巴样干细胞分化而来。

2.分布：广泛分布于脑以外的全身骨组织和器官，但数量很少。

3.生物学功能：

①抗原呈递：吞饮，受体介导的内吞作用，吞噬，表面补获。

②调节免疫应答：分泌多种细胞因子。

2.单核—吞噬细胞系统

来源：骨髓造血干细胞衍生而来。

分布：在血液中分布于单核细胞中，在组织器官中分布于巨噬细胞。

生物学功能：

①吞噬消化。

②杀伤肿瘤细胞。

③加工和呈递抗原。

④调节免疫应答。

⑤介导炎症反应。

3.B淋巴细胞：

来源：骨髓造血干细胞衍生而来。

分布：由骨髓造血干细胞产生，在脾脏或腔上囊发育成熟，然后随血循环到周围淋巴器官。

生物学功能：

①加工和呈递抗原

②产生抗体。

③分泌细胞因子参与免疫调节等。

T细胞活化：

第一信号： Apc抗原呈递递细胞表面mhc抗原肽复活物与T细胞表面的TCR结合。

第二信号： Apc抗原呈递细胞表面B7分子与t细胞表面CD28分子结合。

第三信号：lL-1和IL-2等细胞因子是刺激T细胞活化的第3信号。

T细胞应答的效应及机制

1. Th1细胞介导的细胞免疫效应

（1） Th1细胞对巨噬细胞的作用

—激活巨噬细胞：

—诱生并募集巨噬细胞：

（2） Th1细胞对T细胞的作用

产生IL-2，促进Th1和CTL增殖，放大免疫效应。

（3） Th1辅助B细胞产生调理性抗体

（4） Th1对中性粒细胞的作用

产生淋巴毒素和 TNF—阿尔法，活化中性粒细胞促进其杀伤病原体的作用。

2.细胞毒T细胞（CTL）介导的细胞毒效应

主要通过两条途径杀伤靶细胞：

（1）穿孔素颗粒酶途径：

（2） TNF与FasL途径：介导靶细胞凋亡。

抗原分为两类：

TI-Ag（胸腺非依赖性抗原），TD-Ag（胸腺依赖性抗原）

B细胞的活化：

（1）TI抗原刺激b细胞活化——直接作用

（2）TD抗原刺激b细胞活化

①第一信号（抗原刺激信号）：抗原与b细胞结合。

②第二信号（ Th 细胞信号）： Th特异性识b细胞表面呈递的抗原肽，th表面的CD40L与B细胞表面的CD40结合，启动共刺激信号。

③第三信号： Th细胞分泌细胞因子辅助B，细胞活化增殖和分化。

体液免疫应答的一般规律：

1.初次免疫应答（ primary immune response）：抗原初次进入机体所产生的应。

分为潜伏期，对数期，平台期，下降期。

特点：潜伏期长，抗体的种类以igm为主，抗体亲和力低，总抗体水平低。

2.再次免疫应答（secondary response）：同一抗原再次进入机体所产生的应。

特点：潜伏期短约2~3天，抗体的种类以IgG为主，抗体亲和力比初次应答明显增，持续时间长，总抗体水平高。

B细胞应答的效应：

1中和作用

血液中IgG和粘膜上的SIga

中和毒素中合病原体，防止病毒吸附进入宿主细胞。

2免疫调理

3激活补体

4抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）

5免疫损伤作用

超敏反应可引起超敏123型超敏反应

自身免疫病

移植排斥反应

促进肿瘤生长

6.粘膜抗感染。

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